Вход

 
 
 

ЛАЛ-тест

Основным показателем качества воды, применяемой для приготовления инъекционных/инфузионных растворов является апирогенность.

Термин «пироген» происходит от греческого “pyreto” – лихорадка. Пирогенами называют вещества, способные вызывать повышение температуры тела при попадании в кровь. К ним относят: грамотрицательные бактерии и их токсины, вирусы и продукты их жизнедеятельности, погибшие микробные клетки и пр. По химическому составу пирогенные вещества представляют собой липополисахаридные или липополисахаридно-протеиновые комплексы  наружных мембран  грамотрицательных бактерий, так называемые – бактериальные эндотоксины.

Пирогенные вещества – это высокомолекулярные соединения, они нелетучи и не перегоняются с водяным паром.  Загрязнение дистиллированной воды пирогенными веществами происходит чаще всего в результате переброса капельной фазы, содержащей пирогенные вещества, из испарителя в конденсатор и сборник аквадистиллятора.

Поэтому главной задачей при получении воды для инъекций является отделение капелек воды от паровой фазы, уменьшение толщины кипящего слоя, обеспечение равномерного кипения и оптимальной скорости парообразования.

Пирогены  – термостабильные вещества, они разрушаются только при нагревании в суховоздушных стерилизаторах при температуре 250°С в течение 30 минут. При воздействии пара под давлением (t 120°С автоклавированием) в растворах пирогены разрушаются только через 5 часов.  Следовательно, освободиться от пирогенных веществ в воде и инъекционных растворах при помощи термической стерилизации практически невозможно.

Таким образом, каждый инъекционный раствор после его правильной стерилизации стерилен, но не каждый стерильный раствор – апирогенен.

Стерильность и  апирогенность – разные понятия и подменять одно другим – нельзя.

Отсюда ясна важность строжайшего соблюдения аптечным учреждением асептических условий изготовления инъекционных растворов на всех этапах, независимо от последующей стерилизации.

Существует химический метод депирогенизации (очистки от пирогенных веществ) – это выдерживание в подкисленном кислотой серной 0,5% -1% растворе калия перманганата в течение 25-30 минут (метод используется для обработки стеклянных соединительных трубок и сосудов), согласно приказа МЗ РФ № 309 от 21.10.1997г. «Инструкция по санитарному режиму аптечных организаций (аптек)».

В связи с опасностью пирогенного эффекта проверке на «Пирогенность» должны подвергаться растворы, вводимые внутривенно в объемах 10 мл и более (ГФ ХI).

По фармакопейной методике (ГФ ХI) пирогенность определяется с помощью биологического метода, основанного на изменении температуры тела кролика после введения испытуемых препаратов. Для этого исследуемый раствор препарата или 0,9% изотонический раствор натрия хлорида, приготовленный  на испытуемой воде, вводят трем кроликам, в ушную вену из расчета 10 мл на 1 кг веса кролика. Раствор лекарственного вещества или воду считают апирогенными, если в каждом из трех измерений температура тела кролика не должна повышаться более, чем на 0,6 °С, а в сумме не должна превышать 1,4 °С. Относительная чувствительность в данном случае составляет 1 – 10 нг/мл.

Недостатки биологического метода: зависимость результатов от индивидуальной чувствительности животного, большее восприятие пирогенной реакции человеком по сравнению с кроликом и высокие затраты на содержание и уход за животными (метод экономически дорог).

Фармакопея США ХХ (1980г.)  включила  наряду с испытаниями на кроликах определение пирогенных веществ с помощи реакции гелирования лизата амебоцитов крови (гемолимфы) мечехвоста  вида Limulus polyphemus.

В 1964 г. в США было доказано, что клетки крови мечехвоста  вида Limulus polyphemus  способны специфически реагировать с эндотоксинами грамотрицательных бактерий (пирогенами). В результате реакции эндотоксина и лизата происходит помутнение реакционной смеси или образование твердого геля, что и служит индикатором присутствия эндотоксина в испытуемом растворе.

Поскольку первые исследования были проведены на мечехвостах, препарат, полученный из их крови, был назван Лизат амебоцитов Limulus (Limulus amebocyte lysate), сокращенно ЛАЛ-реактив, и, соответственно, ЛАЛ-тест.

ЛАЛ-реактив представляет собой лиофильно высушенный препарат. Это водный экстракт (лизат) амебоцитов, содержащий все компоненты, необходимые для реакции с эндотоксином.

Для проведения анализа методом гель-тромб тест предназначены ЛАЛ-реактивы Endosafe и Endosafe KTA.

Фармакопея Японии, Европейская Фармакопея также включили наряду с биологическим методом определение пирогенных веществ с помощи реакции гелирования лизата амебоцитов крови мечехвоста.

На основе вышеуказанной реакции гелирования разработан активно развивающийся способ контроля  качества лекарственных средств, определяющий наличие бактериальных эндотоксинов  in vitro – ЛАЛ-тест.

И сегодня ЛАЛ-тест считается наиболее надежным  и перспективным способом проверки потенциальной пирогенности лекарственных средств.

Преимущества этого теста – высокая чувствительность, простота выполнения, надежность, хорошая воспроизводимость, возможность анализировать в короткий срок большое число образцов.

При массовом использовании этот метод, безусловно, дешевле теста на кроликах.

Опубликовано 7 июня 2010